- Электрофорез
- Диагностика Необластом(ОПУХОЛЕЙ)
- Воспитание щенков и котят
- Кормление собак и кошек
- Чтобы не болеть
- Уход за зубами
- Уход за кожей и шерстью
- Блохи у кошек и собак
- Болезни морских свинок
- Болезни кроликов
- Состояние зубов
- Стрижка животных
- Удаление когтей
- Укус клеща у собак
- Переломы у собак, кошек
- Роды кошки и собаки
- Вопросы и Ответы
- Статьи
- Карта сайта
- covid19
- Исследования опухоли крысы(Роберта)
ТОКСОПЛАЗМОЗ
Актуальность проблемы, Терминология, Патоморфологическая характеристика первичного очага и Токсоплазмозного сепсиса при экспериментальном Заражении животных.
В.А.Бугаев – Президент ассоциации ветеринарних врачей Казахстана, г. Алматы.
А.М. Бугаев – Директор Центра охраны здоров’я животных г.Киев.
Работа опубликована в Интернете 25 ноября 2014г.
( РАЗДЕЛ II )
ЧАСТЬ ТРЕТЬЯ
ПАТОМОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПЕРВИЧНОГО
ОЧАГА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ЗАРАЖЕНИИ ЖИВОТНЫХ
Несмотря на то, что проблеме токсоплазмоза посвящено тысячи публикаций, некоторые аспекты патогенеза и паразито – хозяинных отношений ещё слабо освещены. Одним из таких аспектов является вопрос о воротах инвазии, а точнее проникновения токсоплазм в организм человека и животных при спонтанном заражении. В естественных условиях очень трудно определить место проникновения токсоплазм в организм человека и животных, поскольку им подвласты любые ткани. Поэтому основные ответы на эти вопросы мы получаем при экспериментальном заражении животных.
В нашем пособии - «Токсоплазмоз мелких домашних животных – мифы и факты» подробно излагаются морфологические изменения при формировании первичного очага в различных тканях при экспериментальном введении, как вирулентных, так и слабовирулентных штаммов токсоплазм. Здесь же мы приводим только часть материалов включённых в пособие по формированию первичного токсоплазмозного очага при пероральном и внутрибрюшинном заражении животных.
Надеемся, что публикуемая работа поможет специалистам на тканевом уровне лучше понять патоморфогенез токсоплазмоза и осознано назначать лечение в зависимости не только от фазы проявления заболевания, но и стадий развития и размножения токсоплазм.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Для данной публикации послужил патматериал, собранный А.М. Бугаевым при проведении экспериментальных работ на белых мышах, собаках и кошках в лаборатории токсоплазмоза Института Зоологии АН.Каз.ССР. Работы проводились в комплексе с профессором В.Ф.Новинской и СНС У.Д.Вустиной в период с 1964 по 1974 год, под непосредственным руководством академика И.Г.Галузо. В последние годы собранный патматериал технически доработан с использованием современных методов окрасок и современных компьюрерных технологий. В работе так же использованы архивные материалы авторов, которые получены при рутинной работе с мелкими домашними животными в Центре охраны здоровья животных г. Киева и в Ветеринарно – диагностическом центре г. Алматы. В публикации дан краткий анализ работ по патоморфогенезу и патогенезу опубликованных в открытой печати последних лет, включая Интернет – сообщения.
КРАТКИЕ ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ О ТОКСОПЛАЗМАХ
Возбудителем токсоплазмоза является микроскопический одноклеточный паразит Toxoplasma gondii, в жизненном цикле которого имеется стадия колониального развития и размножения в виде тканевых цист. Именно влияние этой фазы развития паразитов на организм человека и животных вызывает, в последние годы, удивления, которые учёные не ожидали. Уже документально доказано, с применением видиосъёмок, что токсоплазмы находясь в цистном состоянии, не вызывая выраженных морфологических изменений в органах животных и человека, своими продуктами обмена
не только снижают иммунитет, но и замедляют ответные реакции
организма на стрессовые ситуации. И самое главное, у животных и людей теряется чувство страха (Пример, опыты с крысами, исследования причин автомобильных аварий и суицидов).
В природе существует только один вид токсоплазм - Toxoplasma gondii. Однако имеется множество штаммов, которые отличаются друг от друга по своей вирулентности и патогенности, а также по цитохимической, и антигенной структуре.
Эти особенности токсоплазм связаны со сложной ультраструктурной организацией паразита. Она даёт паразиту возможность успешно паразитировать не только во многих клетках своей жертвы, но даже в клетках эволюционно предназначенных в организме животных и человека для уничтожения любого патогенного агента, включая и токсоплазм.
Токсоплазмы имеют очень сложное эндогенное развитие, и размножение в организме промежуточных хозяев, и особенно в организме представителей семества кошачьих. В зависимости от стадии развития токсоплазм попавших в организм кошек, они (представители семейства кошачьих) могут быть только дефинитивными хозяевами или одновременно являтся дефинитивными и промежуточными, или только промежуточными хозяевами.
В настоящее время наиболее хорошо изучена морфологическая и цтохимическая структура трофозоитов токсоплазм. Для более чёткого предстваления морфологии трофозоитов в световом и электронном микроскопах, мы приводим схему - рисунок Маркун Татьяны Андреевны опубликованную в прекрасно иллюстрированной статье под названием «Класс споровики», появившейся в Интернете в 2014 году. На схеме, на наш взгляд, хорошо показаны все морфологические особенности трофозозоитов токсоплазм, как на клеточном, так и субмикроскопическом уровне (Схема - рис).
Схема – рисунок трофозоитов токсоплазм выполненная Т.А.Маркун.
На схеме, чётко нарисованы трофозоиты токсоплазм при разном увеличении. Однако так паразитов можно видеть только на схемах и рисунках. В цитологических препаратах, в брюшном экссудате, и особенно в мазках крови и гистологических срезах, токсоплазм обнаружить бывает очень и очень трудно. Это ограничивает паразитологические методы при диагностике токсоплазмоза, как у людей, так и у животных. Для выявления токсоплазм, например, в гистологических срезах, нужны специальные методы приготовления и окрасок срезов. Мы для этого рекомендуем готовить срезы толщиной 3 – 4 микрона и окрашивать их железным гематоксилином, с докраской слабым раствором эозина в течение 10 – 15 часов. В мазках крови токсоплазмы хорошо выявляются по методу Романовского – Гимза и с помощью набора Лейкодиф (Фото 1 - 5).
Микрофото 1. Часть 3. Мазок крови котёнка погибшего от острого приобретённого (неэкспериментального) токсоплазмоза. Стрелкой показана группа свободных, внеклеточных трофозоитов токсоплазм в крови котёнка. Окраска с помощью набора Лейкодиф. Ув. Об.40 х ок.10.
Микрофото 2. Часть 3. Показаны трофозоиты токсоплазм в пластинчатом препарате брыжейки белой мыши. Окраска по Романовскому - Гимза с докраской метиленовым синим.
Фото 3. Часть 3. Гистологический срез печени щенка погобшего от острого токсоплазмоза на 15 сутки после экспериментального заражения вирулентным штаммом токсоплазм CDN. Показана морфология внеклеточных и внутриклеточных трофозоитов токсоплазм вокруг микронекроза. Окр.железным гематоксилином с докраской эозином.
Фото 4. Часть 3. Гистологический срез селезёнки щенка, экспериментально зараженого трофозоитами вирулентного штамма CDN. В просвете венозных синусов видны свободные тахизоиты токсоплазм в фазу токсоплазмозного сепсиса (Показано стрелкой). Окраска железным гематоксилином и эозином.
Фото 5. Часть 3. Гистологический срез печени кошки павшей от острого приобретённого токсоплазмоза в ветеринарной клинике Центра охраны здоровья животных г.Киева (Март, 2014г). Показаны токсоплазмы по перифирии микронекроза. Окраска обычным гематоксилином.
Характеристика первичного очага
В кишечнике кошек
Достоверно установлено, что токсоплазмы могут проникать в организм человека и животных многими путями – перорально, путём попадания паразитов на слизистые оболочки различных органов, через кожу, если есть участки поражения – порезы, царапины, эрозии, язвы и трансплацентарно. Однако основными путями проникновения является пищевой и трансплацентарный. В зависимости от того каким путём паразит проник в организм человека и животных различают токсоплазмоз врождённый (при трансплацентарном проникновении) и приобретённый(при любом проникновении после рождения).
В этом сообщении речь пойдёт об экспериментальном, приобретённом, токсоплазмозе. Вначале, мы покажем случаи заражения животных перорально. Поскольку человек и животные чаще заражаются именно этим путём, когда поедают сырое или недостаточно термически обработанное мясо скота, заражённого токсоплазмами. Интересно отметить, что, несмотря на широкое распространение токсоплазмоза среди людей и животных, ни в одной стране мира не разработаны санитарные нормы для мяса скота, чтобы предупредить заражение токсоплазмами людей и мелких домашних животных. После того, что мы узнали о влиянии токсоплазм на организм человека и животных, так и напрашивается вывод, что токсоплазмы, каким – то образом влияют на сознание и подсознание чиновников, которые не хотят замечать этого возбудителя. А ведь достоверно доказано, что в странах, где традиционно употребляется плохо прожаренное мясо (бифштексы с кровью и другие блюда) процент заражения людей в разы выше, чем в странах с нормальной кухней. В плохо обработанном термически мясе скота заражённого токсоплазмами могут быть, как цисты токсоплазм, так и свободные, внеклеточные паразиты, т.е. трофозоиты и брадизоиты (Фото 6). Проглотив вместе с мясом даже одну цисту, кроме трофозоитов, в их организм попадает сразу около 20 – 30 тысяч так называемых брадизоитов или цистозоитов. Результат поедания плохо обработанного термически мяса всегда имеет пагубные последствия. В лучшем случае - хроническое или латентное течение болезни, в худшем – токсоплазмозный сепсис и смерть организма.
Фото 6. Часть 3. Гистологический срез головного мозга белой мыши после экспериментального заражения слабовирулентным штаммом токсоплазм LEI. В белом веществе виднаы внеклеточные трофозоиты и две внеклеточные цисты, находящиеся на разных стадиях колониального развития. (Показано стрелками). Окраска железным гематоксилином с докраской эозином.
Поскольку в природе существует множество штаммов токсоплазм различающихся по своей вирулентности и патогенности, результат первичного взаимоотношения токсоплазм с организмом человека и животных будет различным. В данном сообщении мы рассмотрим ситуацию, когда происходит встреча высоковирулентного штамма токсоплазм с организмом хозяина. В нашем случае встреча штамма RH и CDN с организмом белых мышей, кошек и собак (щенков).
При скармливании кошкам тушек белых мышей заражённых штаммом RH и павших от острого токсоплазмоза, мы наблюдали, как трофозоиты токсоплазм тысячами, в разных местах тонкого отдела кишечника (двенадцатиперстной, тощей и подвздошной) атакуют слизистую оболочку, вызывая иногда очаговый, а нередко и диффузный десквамативный катар. При этом ворсинки слизистой оболочки полностью лишаются покровного эпителия (Фото 7).
Фото 7. Часть 3. Гистологический срез тощей кишки котёнка через 5 часов после скармливания ему органов белой мыши погибшей от острого токсоплазмоза, предварительно заражённой токсоплазмами высоковирулентного штаммом RH. Показано огромное количество токсоплазм внедряющихся в глубину ворсинки. Практически, весь покровный эпителий разрушен, а паразиты интенсивно инвазируют подэпителиальную ткань. Хорошо видно большое различие форм и размеров токсоплазм. У многих паразитов чётко различаются крупные ядра с ядрышками (Показано стрелками). Окраска по Романовскому - Гимза.
Часть токсоплазм проникших вглубь ворсинки вызывают гидролиз (не некроз, а гидролиз!) подэпителиальной ткани ворсинки, в которой внеклеточно паразиты активно размножаются. К 10 часу после скармливания (заражения) котятам белых мышей, отмечалась уже интенсивная инфильтрация ворсинок лейкоцитами. При этом, многие токсоплазмы обнаруживались в цитоплазме лейкоцитов. Морфологически наличие в цитоплазме большого количества паразитов, свидетельствует об интенсивном размножении паразитов в лейкоцитах. Особенно много инвазированных лейкоцитов выявлялось по периферии гидролизированного участка. Часть внутриклеточных и внеклеточных паразитов, вместе с эпителием слизистой оболочки десквамировалась в просвет кишечника (Фото 8).
Фото 8. Часть 3. Гистологический срез стенки тощей кишки двухмесячного котёнка через 10 часов после перорального заражпения вирулентным штаммом токсоплазм RH. Показан первичный очаг серозно - десквамативного воспаления в месте проникновения трофозоитов в слизистую оболочку кишечника. В центре очага видна гомогенезированная белковая масса, в которой распологается большое количество внеклеточных, хорошо сохранившихся токсоплазм. По периферии первичного очага так же видны токсоплазмы расположенные, как внутриклеточно, так и внеклеточно. В левой части фотографии показан участок слизистой оболочки с десвамацией в просвет кишечника покровного эпителия ворсинки и огромного количества внеклеточных и внутриклеточных токсоплазм. Окраска железным гематоксилином и эозином.
Через 26 часов после заражения большое количество трофозоитов токсоплазм обнаруживалась и в подслизистом слое тонкого отдела кишечника. Здесь они так же вызывали гомогенезацию (гидролиз) волокон соединительной ткани. Участки скоплания токсоплазм были инфильтрированы небольшим количеством лейкоцитов (Фото 9).
Фото 9. Часть 3. Гистологический срез первичного очага тощей кишки двухмесячного котёнка. Показано большое количество внеклеточных токсоплазм и незначительная инфильтрация соединительной ткани лейкоцитами. Часть паразитов видна в цитоплазме лимфоцитов и моноцитов. Окр. Железным гематоксилином с докраской эозином.
Такая степень инвазии слизистой оболочки кишечника наблюдалась на протяжении 6 – 9 суток, после чего котята погибли при явлениях острого энтерита, общей интоксикации и токсоплазмозного сепсиса. На всём протяжении эксперимента (девять суток), в кишечнике наблюдалось интенсивное размножение токсоплазм, как внутри лейкоцитов и клеток РЭС, так и внеклеточно в гидролизированной слизистой оболочке тонкого отдела кишечника. Катарально - десквамативное воспаление в первичном очаге (в воротах инвазии) способствует тому, что трофозоиты и мерозоиты токсоплазм способны проникать, как во внутренние органы, вызывая сепсис, так и в просвет кишечника выделяясь вместе с калом во внешнею среду.
Таким образом, при скармливании котятам органов белых мышей предварительно заражённых вирулентным штаммом токсоплазм RH, в кишечнике образуется не один, а множество первичных очагов. При этом они вызывают, как очаговое, так и диффузное катарально - десквамитивное воспаление слизистой оболочки. У всех убитых и павших котят, в слизистой оболочке кишечника, обнаруживались очаги поражения, в которых наблюдалось размножение токсоплазм, как в лейкоцитах, так и клетках РЭС. Важно отметить, что при заражении 9 котят вирулентным штаммом токсоплазм и павших на 6 -9 сутки от острого токсоплазмоза, мы не в одном случае не наблюдали в эпителии слизистой оболочки полового процесса. Хотя клинически и морфологически у котят отмечался острый токсоплазмоз с токсоплазмозным сепсисом.
Следует особо отметить, что при заражении кошек вирулентным штаммом токсоплазм RH, хотя и отсутствовала половая фаза размножения, в просвет кишечника выделялось огромное количество трофозоитов и мерозоитов. Последние, как известно, во внешней среде (в кале) сохраняют свою инвазионную способность от 5 - 10 минут до часа, что зависит от температуры и влажности воздуха. Учитывая данные эксперимента Е.П.Ковалёвой и др.(1988) о том, что трофозоиты и мерозоиты токсоплазм могут выделяться до 212 суток после заражения (срок наблюдения), из мочи, слюны, отделяемого из глаз, слизи носа и фекалий, то не трудно предположить, что даже при отсутствии зигоцист (ооцист) в кале, последний может служить источником заражения, как людей, так и животных, которые контактируют с заражённой кошкой, поскольку в кале могут находится трофозоиты или мерозоиты токсоплазм.
(Подробнее об этом эксперименте вы можете прочитать в нашем пособии).
ХАРАКТЕРИСТИКА ПЕРВИЧНОГО ОЧАГА В БРЫЖЕЙКЕ
БЕЛЫХ МЫШЕЙ
Детально первичное проникновение токсоплазм в организм животных нами было прослежено на примере белых мышей заражённых внутрибрюшинно вирулентным штаммом токсоплазм CDN. В опыте находилось 80 мышей, которые вскрывались на разных стадиях инвазионного процесса. Часть животных пала на 6 -7 сутки после заражения.
Через два часа после заражения, на брызжейке белых мышей, даже невооруженным глазом, можно было видеть множество небольших очажков светло – розового цвета. При просмотре пластинчатых препаратов, приготовленных из брыжейки белых мышей и окрашенных по Романовскому – Гимза, при малых увеличениях микроскопа в одном поле зрения можно было видеть от 2 до 4-х небольших скоплений лейкоцитов( Фото 10).
Фото 10. Часть 3. Пластинчатый препарат брызжейки белой мыши, убитой через 2 часа после заражения. Показано очаговое скопление клеток воспалительного инфильтрата на месте проникновения токсоплазм в брыжейку. Окр. по Романовскому – Гимза.
При изучении таких скоплений при большом увеличении микроскопа можно было видеть, что многие крупные и средниел лимфоциты, а так же нейтрофилы и моноциты инвазированы токсоплазмами. Вокруг инвазированных лейкоцитов отмечалось увеличенное количество мелких лимфоцитов (Фото 11).
Фото 11. Часть 3. Пластинчатый препарат брыжейки белой мыши через 2 часа после внутрибрюшинного заражения вирулентным штаммом CDN. Показана группа моноцитов цитоплазма и ядра, которых нвазированны токсоплазмами. Цитоплазма паразитов даёт резко положительную реакцию на РНК (Показано стрелками). Вокруг инвазированных лимфоцитов и моноцитов видны скопления мелких лимфоцитов. В правом верхнем углу фотографии виден юный нейтрофил, в цитоплазме которого просматривается делящийся трофозоит (Показано жирной стрелкой). Окр. по Браше.
Деталь фото 11. Показаны токсоплазмы в ядре моноцита(Белая стрелка), вокруг моноцита видно скопление мелких лимфоцитов. В цитоплазме средних лимфоцитов и мезотелиальных клетках видны разные стадии образования биполярных мерозоитов (парашутиков) - показано тёмными стрелками.
На приведённой фотографии определённый интерес представляет группа токсоплазм расположенная в нижнем правом углу. Морфологическая структура этих паразитов свидетельствует о множественном делении токсоплазм - шизогонии. Размеры дочерних клеток (мерозоитов) образовавшихся при этом в 3- 4раза меньше обычнвх трофозоитов, некоторые из них имеют два базофильных образования по полюсам цитоплазмы. Отдельные мерозоиты напоминают форму парашутиков. (Морфологически сходные формы паразитов нами обнаруживались в головном мозге щенков при остром экспериментальном токсоплазмозе щенков вирулентным штаммом CDN и в кишечнике котят, в первые часы после орального заражения тканевыми цистами слабовирулентного штамма LEI) - Фото 12 – 14.
Фото 12. Часть 3. Гистологический срез мозжечка щенка экспериментально внутрибрюшинно заражённого вирулентным штаммом токсоплазм CDN и погибшего от острого экспериментального токсоплазмоза. Показан очаг внеклеточного размножения токсоплазм при окраске среза по Браше. Видны разные стадии и способы внеклеточного размножения токсоплазм в белом веществе мозжечка. Некоторые из них морфологически сходны с таковыми в брызжейке белых мышей.
Фото 13. Часть 3. Гистологический срез слизистой оболочки тонкого отдела кишечника котёнка через 3 часа после заражения слабовирурентным штаммом LEI. В просвете кишечника и в эпителии ворсинок видны морфологические формы токсоплазм сходные с таковыми в мозжечке щенка и в брызжейке белых мышей (стрелки). Окраска гематоксилин – эозином.
Фото. 14. Часть 3. Мазок - отпечаток слизистой оболочки подвздошной кишки котёнка на четвёртые сутки после заражения. В эпителиальных клетках ворсинок видно большое количество паразитов имеющих продолговато - овальную форму. Среди них можно видеть небольшое количество токсоплазм имеющих форму «парашутиков» (Показано стрелкой). Окраска по Романовскому - Гимза.
Что представляют собой такие паразиты, и какую роль они играют в жизненном цикле токсоплазм, на уровне светового микроскопа, определить нам не представилось возможным.
Беспорным фактом является то, что мерозоиты токсоплазм с подобными морфологическими формами можно было видеть не только в цитоплазме лимфоцитов, но и в их ядрах (Фото 15).
Фото 15 Часть 3. . Пластинчатый препарат брыжейки белой мыши, убитой через 4 часа после внутрибрюшинного заражения токсоплазмами вирулентного штамма CDN. Видна небольшая инфильтрация брызжейки лимфоцитами. Хорошо просматривается размножение токсоплазм в цитоплазме и ядрах средних и крупных лимфоциотв (показано стрелками) . Окр. По Романовскому - Гимза.
Наряду с такими очагами размножения токсоплазм, у мышей убитых через 4 часа после заражения, рядом с воспалительными очагами можно было видеть токсоплазмы, которые находились в цитоплазме мезотелиальных клеток брыжейки. И судя по их морфологии трофозоиты делятся путём эндодиогении. Никакой воспалительной реакции вокруг таких трофозоитов не обнаруживалось (Фото 16 ).
Фото 16 . Часть 3. Пластинчатый препарат брыжейки белой мыши через 4 часа после внутрибрюшинного заражения вирулентным штаммом CDN. Показаны трофозоиты токсоплазм в цитоплазме мезотелиальных клеток. Одни из них имеют полулунную форму, другие – продолговато - овальную. Как у тех, так и у других, ядра расположены в центре трофозоитов. Рядом видна инвазированная мезотелиальная клетка с четырьмя эндозоитами (Стрелки). Никакой воспалительной реакции вокруг инвазированных мезотелиальных клеток нет. Окраска по Романовскому - Гимза.
В результате деления, в мезотелиальных клетках образуются большие колонии токсоплазм, вокруг которых клеточная реакция отсутствует (Фото 17 - 18).
Фото 17. Часть 3. Пластинчатый препарат брыжейки белой мыши убитой через 6 часов после внутрибрюшинного заражения. Показаны различные фазы митотического деления токсоплазм расположенных в цитоплазме мезотелиальной клетки. В одной из токсоплазм хорошо видно начало продольного деления цитоплазмы клетки паразита на 2 части (Показано тёмной стрелкой). Воспалительная реакция вокруг размножающихся токсоплазм отсутствует. Окр. По Романовскому - Гимза.
Фото 18. Часть 3. Пластинчатый препарат брыжейки белой мыши через 21 час после внутрибрюшинного заражения вирулентным штаммом CDN. В цитоплазме мезотелиальных клеток видны трофозоиты находящиеся на разных стадиях прямого бинарного деления. При этом хорошо видно продольное деление цитоплазмы трофозоита. т.е. паразиты образуются не путём эндодиогении, а путём простого бинарного деления. Трофозоиты токсоплазм при этом довольно крупных размеров и свободно расположены в цитоплазме мезотелиальных клеток. Воспалительная реакция вокруг таких колоний токсоплазм отсутствует. Окр. по Романовскому –Гимза.
Достоверно установлено, что в острую фазу токсоплазмоза, паразиты могут поражать многие клетки животных. Однако, мало кому известно, что вначале инвазионного процесса, токсоплазмы паразитируют в клетках крови - нейтрофилах, средних и крупных лимфоцитах, моноцитах, клетках РЭС, а затем уже в гепатоцитах и клетках различных органов ( Фото 19 – 24).
Фото 19. Часть 3. Пластинчатый препарат брыжейки белой мыши, убитой через 2 часа после заражения. Показан хорошо сформированный трофозоит T. gondii в цитоплазме нейтрофила. Окраска по романовскому - Гимза.
Фото 20. С помощью электронного микроскопа сфотографирован момент проникновения трофозоита в нейтрофил. Фото взято из работы J. P. Dubey,1,* D. S. Lindsay,2 and C. A. Speer3« Structures of Toxoplasma gondii Tachyzoites, Bradyzoites, and Sporozoites and Biology and Development of Tissue Cysts»† Работа появилась в Интернете в 2003 году.
Transmission electron micrograph of a tachyzoite of the VEG strain of T. gondii penetrating a neutrophil in mouse peritoneum; note the moving junction (Mj) at the site of penetration into the neutrophil and the extraordinary early development of the tubulovesicular (more ...).
Фото 21. Часть 3. Мазок приготовленный из брюшного экссудата белой мыши экспериментально заражённой трофозоитами токсоплазм вирулентного штамма CDN. Препарат обработан акрединовым оранжевым. Показаны два трофозоита в цитоплазме лимфоцита.
Фото 22. Часть 3. Пластинчатый препарат белой мыши убитой через 4 часа после заражения. На фоне хорошо сохранившегося мезотелия отчётливо выделяется гипертрофированный моноцит, в цитоплазме которого находится шизонт округлой формы. Вокруг шизонта видна большая паразитофорная вакуоль. Цитоплазма моноцита вакуолизирована. Окр. По Романовскому - Гимза.
Фото 23. Часть 3. Пластинчатый препарат брыжейки белой мыши на 4 сутки после внутрибрюшинного заражения токсоплазмами вирулентного штамма CDN. Показана начальная фаза формирования псевдоцисты в цитоплазме моноцита. Окраска по Ромоновскому -Гимза.
Фото 24. Часть 3. Пластинчатый препарат брызжейки белой мыши убитой на 5 сутки после внутрибрюшинного заражения токсоплазмами вирулентного штамма «CDN». Показаны разные стадии размножения токсоплазм в моноцитах. Окраска по Романовскому - Гимза.
Наши цитологические исследования показали, что псевдоцисты в клетках организма хозяна образуютсяч в конце острого периода заболевания и в подострую фазу и только в клетках РЭС – в цитоплазме гистиоцитов, адвентициальных и эндотелиальных клеток, мезотелиальных клетках брюшины и брыжейки, в спленоцитах и никогда в гепатоцитах и нейронах. При этом псевдоцисты формируется в одной паразитоформенной вауоле, когда в клетку проникает один паразит - трофозоит или мерозоит. Размножаясь бинарно или путём шизогонии они дают начало формированию большой, внутриклеточной колонии паразитов - псевдоцисте (Фото 25).
Фото 25. Часть 3. Пластинчатый препарат брыжейки белой мыши на 6 сутки после внутрибрюшинного заражения вирулентным штаммом CDN. Показана псевдоциста из плотно прижатых друг к другу токсоплазм заключённых в одну паразитофорную вакуоль (Вакуоль показана стрелкой). Окр. По Романовскому - Гимза.
Нередко в клетки РЭС проникают несколько (10- 30) паразитов и тогда можно в одной инвазвированной клетке видеть разные стадии и способы деления токсоплазм. При этом на 5 -6 сутки после заражения преобладет множественное деление (шизогония), по терминологии Dubey and Frenkel (1972) путём расщипления материнской клетки. При этом вокруг каждой группы паразитов формируется своя паразитофорная вакуоль (Фото 26 - 27).
Фото 26. Часть 3. Пластинчатый препарат брыжейки белой мыши, убитой через 80 часов после заражения. Показана множественная инвазия мезотелиальной клетки. Видны токсоплазмы находящиеся на разных стадиях бинарного и множественного деления токсоплазм. Многие паразиты делятся путём расчипления материнской клетки (Показано стрелками). Вокруг каждой группы токсоплази хорошо видны паразитофорные вакуоли. При такой степени инвазии псевдоцисты не образуются. Такие клетки со временем разрушаются, а паразиты выпадают в брюшную полость.Окр. железным гематоксилином и эозином, с подкраской метиленовым синим.
Фото 27. Часть 3. Пластинчатый препарат брыжейки белой мыши павшей на 6 сутки после внутрибрюшинного заражения вирулентным штаммом CDN. Показан общий вид брыжейки инвазированной, как отдельными паразитами, так и образующих большие колонии - псевдоцисты. При внимательном рассмотрении фотографии можно заметить, что токсоплазмы делятся как простым делением на две дочерние, так и путём расщипления (шизогонией). Окр. По Романовскому - Гимза.
По мере размножения токсоплазм в лейкоцитах и клетках РЭС их цитоплазма и ядро, вначале, гипертрофируются. Как показали наши исследования, в них усиливается обмен РНК и общего белка, которые идут, по – видимому, и на потребности паразитов. Однако, по мере увеличения количества паразитов в клетках, цитоплазма инвазированных клеток подвергается дистрофии и клетка разрушается. При этом освобождается большое количество мерозоитов и трофозоитов, готовых инвазировать новые клетки организма - хозяина. Часть же паразитов вместе с цитоплазмой инвазированной клетки подвергаются дистрофии и покинув клетку пикнотизируются или лизируются (Фото 28 -29).
Фото 28. Часть 3. Пластинчатый препарат брыжейки белой мыши павшей на 6 сутки после заражения. Показана мезотелиальная клетка, одновременно инвазированная множеством токсоплазм. Цитоплазма инвазированной клетки вакуолизирована, местами оболочка клетки разрушена, а паразиты свободно покидают клетку. Отдельные паразиты находятся в состоянии дистрофии. Окр. железным гематоксилином и эозином, с подкраской метиленовым синим.
Фото 29. Часть 3. Пластинчатый препарат брызжейки белой мыши на 7 сутки после внутрибрюшинного заражения вирулентным штаммом CDN. На снимке показано большое количество тахизоитов токсоплазм на разных стадиях дистрофии. Большая часть из них подвергается пикнозу и рексису, часть тахизоитов находится в состоянии лизиса (Показано стрелками). Окраска железным гематоксилином.
При вскрытии белых мышей заражённых внутрибрюшинно вирулентым штаммом токсоплазм, постоянно можно было наблюдать незначительное утолщение и отёчность серозных оболочек кишечника и паренхиматозных органов. Нами зафиксирован участок капсулы селезёнки подвергнутый гидролизу, в котором обнаружено огромное количество внеклеточных токсоплазм. Морфологическая структура многих паразитов свидетельствовала, что паразиты находятся на разных стадиях бинарного и множественного деления (Фото 30). Подобные очаги, мы наблюдали и в капсуле печени белых мышей.
Фото 30. Часть 3. Гистологический срез капсулы селезёнки белой мыши после внутрибрюшинного заражения её вирулентным штаммом токсоплазм CDN. В гидролизированной капсуле хорошо видно большое количество внеклеточных токсоплазм с чётко сохранившейся морфологической структурой. Форма и размеры части паразитов свидетельствует о внеклеточном делении токсоплазм (показано стрелками). Окр. Железным гематоксилином и эозином.
Часто пишут, что токсоплазмы могут поражать нейроны головного и спинного мозга, но, ни один исследователь не продемонстрировал ещё убедительно токсоплазм в нейронах. Мы так же при изучении сотен гистологических срезов приготовленных из головного мозга экспериментально заражённых животных, ни в одном случае не видели инвазию нейронов токсоплазмами. (Просьба, если у кого есть фотографии достоверно демонстрирующие инвазию нейронов, очень просим прислать такую фотографию авторам. В будущих публикациях мы обязательно будем ссылаться на Ваше авторство)
Таким образом, анализ литературы и проведённые нами цитологическое и гистологические исследования показали, что в проблеме токсоплазмоза есть ещё много белых пятен, особенно в паразито –хозяинных отношениях на уровне клеток. При экспериментальном, внутрибрюшинном заражении животных вирулентными штаммом токсоплазм CDN , нами, в брыжейке белых мышей, было обнаружено множество первичных очагов. В этих очагах токсоплазмы интенсивно размножались, как в лейкоцитах, так и клетках местной РЭС (мезотеальных клетках). Это способствовало быстрому накоплению паразитов в первичных очагах и возникновению токсоплазмозного сепсиса. При этом, трофозоиты и мерозоиты обнаруживались не только во внутренних органах, но в большом количестве накапливались в брюшной полости. Накопление паразитов в брюшной полости сопровождалось выделением в полость большого количества серозного экссудата.
У белых мышей к 6 – 7 суткам после заражения скапливалось до 5 -6 мл. серозного экссудата, в котором можно было видеть большое количество как хорошо сохранившихся паразитов, так и находящихся в состоянии дистрофии и распада. Особо следует подчеркнуть, что в экссудате, наряду с паразитами и их фрагментами, встречалось большое количество фрагментов мезотелиальных клеток и лейкоцитов, которые погибли в результате непосредственного воздействия токсоплазм на эти клетки. Этот факт, очень важен, в плане понимания многогранного положительного действия токсоплазмина и гомеопатических препаратов, приготовленных из серозного экссудата белых мышей.
ЧАСТЬ ЧЕТВЁРТАЯ
МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ТОКСОПЛАЗМОЗНОГО
СЕПСИСА
Токсоплазмозный сепсис - это особое, тяжёлое состояние организма животных и человека, с резко сниженными защитными силами, возникающее на внедрение вирулентных штаммов токсоплазм. Для токсоплазмозного сепсиса характерным является:
1. Наличие первичного очага (в воротах инвазии), из которого происходит постоянная, гематогенная и лимфогенная диссиминация токсоплазм в различные органы.
2. Интенсивное внеклеточное и внутриклеточное размножение токсоплазм, как в первичном очаге, так и в просветах кровеносных сосудов, а так же в паренхиматозных клетках различных органов, вплоть до образования в капиллярах паразитарных эмболов.
3. Наличие морфологических изменений несовместимых с жизнью, которые связаны, как с непосредственным воздействием паразитов на клетки органов, так и их токсинов, образующихся при массовой гибели токсоплазм.
Токсоплазмозный сепсис, обычно, наблюдается у молодых животных и белых мышей всех возрастов. У людей токсоплазмозный сепсис описывается у больных при ВИЧ - инфекциях и при заболеваниях, требующих длительной иммунодепрессивной терапии. При развитии токсоплазмозного сепсиса и отсутствия этиотропного лечения у людей и животных быстро наступает смерть. Белые мыши, например, при нарастающей паразитемии и интоксикации организма, погибают в течение 5-7 суток, щенки и котята через 10 – 20 суток после заражения.
Морфологию токсоплазмозного сепсиса мы изучали в экспериментах на различных видах животных, при разных медодах введении токсоплазмя . В настоящем сообщении, мы приводим данные только экспериментов при внутрибрюшинном заражении щенков, котят и белых мышей вирулентными штаммами токсоплазм . К сожалению, из –за морфологического строения брыжейки щенков и котят (она у них толстая и из неё невозможно приготовить пластинчатые препараты пригодные для цитологического исследования) первичные очаги в брыжейке у этих видов животных нам не представилась возможность изучить. Хотя при вскрытии, макроскопически хорошо были видны светло - розовые очажки. В общем изменения в брыжейке можно квалифицировать как серозно - экссудативное воспаление с выпотом в брюшную полость серозного экссудата. Например, у щенков павших на 15 - 20 сутки после внутрибрюшинного заражения, в брюшной полости, можно было собрать до 40 мл. экссудата. В нём, так же как и у белых мышей, можно было видеть, как хорошо сохранившиеся трофозоиты токсоплазм, так и находящиеся на разных стадиях дистрофии.
У щенков, котят и белых мышей, с помощью морфологических методов исследования, нам удалось проследить отдельные стадии развития и последствия токсоплазмозного сепсиса в различных органах. Наиболее демонстративно токсоплазмозный сепсис прослеживается на примере печени, поскольку токсоплазмы в печени активно размножаются в гепатоцитах, лейкоцитах и внеклеточно в межбалочных капиллярах, образуя в них иногда паразитарные эмболы.
Щенки от острого токсоплазмоза обычно погибают на 15 -20 сутки после заражения. Но уже на 5 -6 сутки, в капиллярах многих органов можно было видеть, как свободных, так и внутриклеточных токсоплазм, которые были включены в цитоплазму лейкоцитов, цитоплазму и ядра гепатоцитов. (Фото 1) .
Фото 1.Часть 4. Гистологический срез печени щенка экспериментально зараженого трофозоитами вирулентного штамма CDN. Показана фаза токсоплазмозного сепсиса на 6 сутки после внутрибрюшинного заражения. Межбалочные капилляры расширены. Местами они заполнены эритроцитами. В капиллярах, в которых находятся трофозоиты, просветы содержат только бесформенную белковую массу, в которой токсоплазмы размножаются внеклеточно. В части гепатоцитов токсоплазмы видны, как в цитоплазме, так и внутри их ядер (показано широкой белой стрелкой). Окраска железным гематоксилином и эозином. Окраска в слабом растворе эозина 15 часов.
Деталь фотографии 1. С помощью компьютерной технологии чётче показаны ядра гепатоцитов инвазированные токсоплазмами. При этом в кариоплазме хорошо видны у токсоплазм эозинофильная цитоплазма и базофильные ядра (Показано стреами). В просветах межбалочных капилляров расположены свободные трофозоиты. Некоторые из них имеют по два ядра, что свидетельствует о их внеклеточном делении. (Показано широкой стрелкой).
На 7-8 сутки после заражения и у щенков павших на 15 сутки токсоплазмозного сепсиса, в дольках печени обнаруживалось множество микронекрозов. Нередко некрозу подвергалась и междольковая соединительная ткать расположенная вокруг вен и артерий. При интенсивной импрегнации срезов печени аммиачным раствором серебра по методу Фута, хорошо видно, что при токсоплазмозном сепсисе поражается не только соединительная ткань и гепатоциты, но и ретикулярная ткань, которая служит основой для печени (Фото 2).
Фото 2. Часть 4. Гистологический срез печени щенка павшего на 15 сутки после внутрибрюшинного заражения тахизоитами вирулентного штамма CDN. Срез импрегнирован аммиачным раствором серебра по методу Фута. Показано множество микронекров, как внутри печёночных долек, так и в междольковых пространствах вокруг вен. При этом хорошо видно, что некрозу подвергаются не только печёночные клетки и соединительная ткань, но и основа печени - ретикулярная ткань.
Сходные микронекрозы в печени нами были обнаружены и при естестенном приобретённом токсоплазмозе. В январе 2014 года, в ветеринарную клинику Центра охраны здоровья животных г. Киева поступила кошка дух лет, с клиническими признаками диареи и клоническими судорогами. При копрологическом исследовании в кале было обнаружено большое количество зигоцист токсоплазм. Иммуноферментный анализ сыворотки крови (Анализ проводился в лаборатории БАЛЬД) выявил наличие в больших концентрациях иммуноглобулинов M и G. Кошка погибла через сутки
после поступления в клинику, не получив ещё противотоксоплазмозных препаратов.
Макроскопически, поражённая печень с поверхности была окрашена в светло – коричневый цвет с желтоватым оттенком. С поверхности и на разрезе она была усеяна множеством мелких, светло – серого цвета некрозами, величеной с просяное зерно. Иногда микронекрозы сливались и тогда были видны большие зоны поражения (Фото 3).
Фото3. Часть 4. На фотографии показана диафрагмальная(выпуклая) часть печени кошки павшей в январе 2014 года от токсоплазмозного сепсиса, возникшего в результате частого кормления её сырым говьяжим мясом. Поверхность печени усеяна микронекрозами. Стрелкой показаны обширные участки некрозов печени в углублении, где входит печёночная артерия и воротная вена.
При гистологическом исследовании печени, в разных участках долек, а так же в междольковой соединительной ткани обнаруживались микронекрозы различной величины. Морфологически они были сходны с таковыпи описанными нами при экспериментальном токсоплазмозе (Фото 4).
Фото 4. Часть 4. Гистологический срез печени кошки павшей от острого приобретённого токсоплазмоза в ветеринарной клинике Центра охраны здоровья животных г.Киева (Январь, 2014г). Показаны микронекрозы в различных участках печёночных долек и междольковой соединительной ткани. Окр.гематоксилин – эозином.
Некрозы в печени, как при естественном заражении, так и при экспериментальном, бывают двух типов. Одни, небольших размеров и обычно расположены внутри долек. Они образуются, как правило, от непосредственного воздействия паразитов. Вокруг таких микронекрозов обычно обнаруживается множество трофозоитов токсоплазм. Паразиты выявлялись, как внутри гепатоцитов, так и в межбалочных капиллярах. При внимательном изучении гистологических срезов окрашенных железным гематоксилином при больших увеличениях светового микроскопа, хорошо можно различить мофологическую структуру паразитов, которая свидетельствует, что токсоплазмы размножаются, как в цитоплазме и ядрах гепатоцитов, так и в просветах межбалочных капилляров, будучи вне каких – либо клеток (Фото 5 - 6).
Фото 5. Часть 4. Гистологический срез щенка на 15 сутки после експериментального заражения вирулентным штаммом токсоплазм. Показаны характерне изменения печени при токсоплазмозом сепсисе - гиперемия межбалосных капилляров и микронекрозы в центральных зонах долек. Вокруг микронекрозов находится большое количество внеклеточных и внутриклеточных трофозоитов (Показано стрелками). Большая часть гепатоцитов находится в состоянии зернистой дистрофии. Окраска железным гематоксилином с докраской слабым раствором эозина в течение 15 часов.
Фото 6. Часть 4. Гистологический срез печени щенка экспериментально зараженого трофозоитами вирулентного штамма CDN. Показана фаза токсоплазмозного сепсиса на 8 сутки после внутрибрюшинного заражения. В межбалочных капиллярах и в цитоплазме гепатоцитов видно большое количество тахизоитов. Морфологическая структура отдельных тахизоитов свидетельствуют о внеклеточном делении паразитов (Показано широкой стрелкой). В верхней части фотографии показаны ядра гепатоцитов инвазированные трофозоитами. При тщательном рассмотрении кариосомы хорошо видна структура трофозоитов токсоплазм, а именно цитоплазма и ядра (Показано стрелками). Окраска железным гематоксилином с докраской слабым раствором эозина в течение 15 часов.
Деталь фото 6. В кариосоме гипертрофированных ядрах гепатоцитов хорошо видны трофозоиты токсоплазм с чётко контурированной цитоплазмой и ядрами (Показано белыми стрелками). Паразиты в ядрах гепатоцитов гораздо меньших размеров, чем трофозоиты расположенные в цитоплазме печёночных клеток (показано тёмными стрелками).
Деталь фото 6. Фото сделано при меньшей контрасности. Лучше видна структура внутриядерных токсоплазм. Чёрной стрелкой показана токсоплазма с чётко контурированным ядром и цитоплазмой в кариосоме гепатоцита. Широкой стрелкой показан четырёхядерный паразит находящийся в межбалочном капилляре.
У белых мышей убитых на 5 сутки после внутрибрюшинного заражения вирулентным штаммом токсоплазм CDN, в просветах межбалочных капилляров печени, на границе с микронекрозами, обнаруживалось большое количество трофозоитов токсоплазм, нередко их было так много, что они формировали паразитарные эмболы (Фото 7).
Фото 7. Часть 4 . Гистологический срез печени белой мыши убитой на 5 сутки после заражения. Показаны морфологические изменения в печени при токсоплазмозом сепсисе - микронекроз вокруг центральной вены, капилляры вокруг микронекроза «нафаршированы» трофозоитами токсоплазм (Показано двумя стрелками). В правом верхнем углу фотографи виден лимфоцит с пятью паразитами(Белая широкая стрелка). Цитоплазма гепатоцитов находится в состоянии некроза и представляется в виде нежной эозинофильной сеточки. Окраска железным гематоксилином с докраской слабым раствором эозина в течение 15 часов.
Деталь фото 7. В межбалочном капилляре показан лимфоцит с 5 токсоплазмами.
В острую фазу заболевания, на пике токсоплазмозного сепсиса, паразиты и микронекрозы обнаруживаются во многих органах – селезёнке, почках, надпочечниках, яичниках и головном мозге (Фото 8 - 14).
Фото 8. Часть 4. Гистологический срез лёгкого щенка экспериментально зараженого трофозоитами вирулентного штамма CDN. Показана фаза токсоплазмозного сепсиса на 6 сутки после заражения. В просветах альвеол и межальвеолярных капиллярах, видны внеклеточные тахизоиты и паразиты, находящиеся в цитоплазме лимфоцитов (Показано стрелками). Окраска железным гематоксилином и эозином.
Фото 9. Часть 4. Гистологический срез лёгкого котёнка, убитого на 6 сутки после экспериментального заражения токсоплазмами вирулентного штамма RH. Показано большое количество свободных тахизоитов в межальвеолярных капиллярах. Белой стрелкой показан лимфоцит в просвете альвеолы, содержащий в цитоплазме три паразита. Окраска железным гематоксилином и эозином.
Фото 10. Часть 4. Гистологический срез лёгкого котёнка, убитого на 9 сутки после экспериментального заражения токсоплазмами вирулентного штамма RH. Показан гипертрофированный моноцит, в цитоплазме которого видны тахизоиты. Паразиты находятся так же и в межальвеолярных капиллярах (Показано белой стрелкой). Окраска железным гематоксилином и эозином.
Фото 11. Часть 4. Гистологический срез лёгкого котёнка павшего на 17 сутки после заражения токсоплазмами вирулентного штамма RH. В серозном экссудате альвеол показаны колонии свободных токсоплазм. Белой стрелкой, в просвете альвеолы показана псевдоциста. Окраска железным гематоксилином и эозином.
Фото 12. Часть 4. Гистологический срез стволовой части головного мозга щенка, павшего от токсоплазмозного сепсиса. Показан капилляр с набухшим эндотелием и группой внеклеточных трофозоитов, расположенных в просвете капилляра. В резко отёчном белом веществе видна группа внеклеточных токсоплазм. Широкой стрелкой показан лимфоцит, в цитоплазме которого находятся токсоплазмы. (Показано стрелками). Окраска по Нисслю.
Фото 13. Часть 4. Гистологический срез стволовой части головного мозга щенка павшего на 15 сутки после заражения вирулентным штаммом токсоплазм CDN . Показан микронекроз захватывающий как белое вещество, так и крупные нейроны. Вокруг микронекроза обнаруживалось большое количество свободных внеклеточных токсоплазм. Окраска по Нисслю.
Фото 14. Часть 4. Гистологический срез головного мозга щенка, павшего на 15 сутки после внутрибрюшинного экспериментального заражения токсоплазмами вирулентного штамма CDN. Показан микронекроз на границе которого видно большое количесво внеклеточных трофозоитов. Окр. По Романовскому - Гимза.
У щенков и белых мышей, наряду с микронекрозами гепатоцитов, образовавшимися в результате размножения в них токсоплазм, обнаруживались микронекрозы, вокруг которых паразиты выявлялись в небольшом количестве или они вовсе отсутствовали. Это так называемые токсические некрозы. В таких некрозах гибели подвергаются не только гепатоциты и соединительная ткань, но и сами паразиты (Фото 15 - 17).
Фото 15. Часть 4. Гистологический срез печени щенка на 10 сутки после заражения. Показана маргинальная зона микронекроза. На границе с микронекрозом видны единичные токсоплазмы (Показано стрлками). Отдельные из них находяться в состоянии дистрофии - лизиса и рексиса. Окраска железным гематоксиліном и эозином.
Фото 16. Часть 4. Гистологический срез печени щенка экспериментально зараженого трофозоитами вирулентного штамма CDN и павшего от острого токсоплазмоза на 15 сутки после заражения. Показан массовый пикноз и рексис (распад) внутриклеточных и внеклеточных тахизоитов. Окраска железным гематоксилином и эозином.
Фото 17. Часть 4. Гистологический срез печени белой мыши заражённой внутрибрюшинно вирулентным штаммом CDN и вскрытой на 6 сутки после заражения. Показана массовая гибель внутриклеточных и внеклеточных токсоплазм в центре и по периферии микронекроза. На снимке видны фрагменты паразитов в виде мелкой базофильной зернистости. Окраска железным гематоксилином и эозином.
У котят заражённых вирулентным штаммом RH, так же в печени обнаруживались микронекрозы. Морфологические изменения в печени котят и щенков были схожи, и их можно было квалифицировать как токсическая дистрофия гепатоцитов. У котят павших в фазу токсоплазмозного сепсиса, наряду с жировой дистрофией, можно было наблюдать зернистое перерождения цитоплазмы гепатоцитов. (Фото 18).
Фото 18. Часть 4. Гистологический срез печени двухмесячного котёнка экспериментально зараженого трофозоитами вирулентного штамма RH и павшего на 11 сутки после заражения. Показан микронекроз вызванный токсическим воздействием токсоплазм. Тахизоиты токсоплазм вокруг таких некрозов не обнаруживаются. Сами гепатоциты находятся в состоянии зернистой и жировой дистрофии. Окраска железным гематоксилином и эозином.
У животных переживших острую фазу, в клетках РЭС различных органов, наряду со свободными трофозоитами, встречаются псевдоцисты. Следует особо подчеркнуть, что псевдоцисты образуются только в клетках РЭС - в печени – в Купферовских клетках, эндотелиальных и адветициальных клетках кровеносных сосудов, селезёнке в спленоцитах(Фото 19).
Фото 19. Часть 4. Гистологический срез печени семимесячного котёнка, на 15 сутки после экспериментального заражения токсоплазмами вирулентного штамма RH. Показана псевдоциста в гипертрофированной клетке Купфера(Чёрная стрелка) и паразитарный эмбол в межбалочном капилляре(Белая стрелка). Среди внеклеточных токсоплазм, в межбалочном капилляре, виден шизонт (Показано широкой стрелкой) Окр. Железным гематоксилином и эозином.
Часто пишут об образовании токсоплазмами псевдоцист в гепатоцитах и нейронах головного мозга, даже приводятся красивые рисунки. Однако мы при просмотре сотен гистологических и цитологических препаратов приготовленных из головного мозга и печени никогда не видели образования псевдоцист в этих клетках. Поэтому подтвердить подобные данные мы не можем (Рис. 1).
Рисунок 1. Часть 4. Показана псевдоциста в клетке печени. Рисунок взят из работы Т.А.Маркун, опубликовыной в Интернете в статье «Класс споровиков». В этот хорошо выполненный рисунок вкрались две терминологические неточности. Первая - псевдоцисты состоят из мерозоитов или эндозоитов, а брадизоиты выявляются в цистах; вторая – если речь идёт о гепатоцитах, то в них псевдоцисты не образуются.
В подострую фазу заболевания в большом количестве токсоплазмы обнаруживаются так же и в селезёнке. Бльшая часть паразитов располагалась свободно в просветах синусов; другая - была включена в цитоплазму спленоцитов. Даже в одном поле зрения микроскопа можно было проследить отдельные стадии образования псевдоцист в цитоплазме спленоцитов. Нередко при этом токсоплазмы обнаруживались и в ядрах спленоцитов. Инвазированные ядра отличались своими большими объёмами (Фото 20).
Фото 20. Часть 4. Гистологический срез селезёнки кота на 20 сутки после экспериментального заражения токсоплазмами вирулентного штамма RH. Показана гиперплазия красной пульпы лимфоцитами и разные стадии формирования псевдоцист в спленоцитах. Большое количество свободных токсоплазм видно в просветах синусов. В центре фотографии видно ядро спленоцита с паразитами (Показано широкой стрелкой).
Фото 21. Часть 2. Гистологический срез селезёнки кота на 20 сутки после экспериментального заражения токсоплазмами вирулентного штамма RH. Подострая стадия токсоплазмоза. Показано формирование псевдоцисты в сплетоците венозного синуса (Показано белыми стрелками). В цитоплазме токсоплазм выявляется большое количество амилопектина. Большое количество паразитов находятся ещё внеклеточно, в синусах красной пульпы ( Показано чёрными стрелками). В цитоплазме токсоплазм выявляется большое количество амилопектина. Окраска по Мак - Манусу.
При подостром токсоплазмозе, дистрофические изменения в паренхиматозных органах ослабевают. Однако отмечаются выраженные сосудистые изменения и особенно в головном мозге. Они проявляются пролиферацией эндотелия и адвентиции кровеностных сосудов. В просветах капилляров мозговых оболочек обычно обнаруживалось большое количество моноцитов, лимфоцитов и эозинофилов (Фото 22 ).
Фото 22. Гистологический срез коры головного мозга щенка на 40 сутки после заражения токсоплазмами высоковирулентного штамма CDN . Показаны капилляры мягкой мозговой оболочки, заполненные большим количеством лейкоцитов. Окраска гематоксилин - эозином.
Лейкоцитами была инфильтрирована и мягкая мозговая оболочка. В клеточных инфильтратах преобладали крупные лимфоциты и моноциты (Фото 23).
Фото 23. Гистологический срез коры головного мозга щенка на границе с мягкой мозговой оболочкой. Щенок убит на 40 сутки после заражения. Показана мягкая мозговая оболочка, инфильтрированная большим количеством лейкоцитов. В нижней части фотографии виден капилляр коры, в просвете которого находятся крупные и малые мононуклеары. Окраска гематоксилин - эозином.
У кошек на 30 сутки после заражения, лейкоцитами были инфильтрирована не только мягкая мозговая оболочка, но и периваскулярные пространства венул и артериол стволовой части мозга (Фото 24 - 25).
Фото 24. Гистосрез коры головного мозга кошки на 30 сутки после внутримышечного заражения вирулентным штаммом RH. Показана интенсивная инфильтрация мягкой мозговой оболочки лейкоцитами.
Фото 25. Гистологический срез стволовой части головного мозга щенка на 40 сутки после заражения. Показано набухание клеток адвентиции артериол и небольшие периваскулярные инфильтраты вокруг них. Препарат окрашен акредин - оранжевым, люминесцентная микроскопия
Подобные клеточные инфильтраты обнаруживались и в периваскулярных пространствах стволовой части мозга. При специальных методах окрасок можно было видеть, что клетки воспалительного инфильтрата находились в активном состоянии, в их цитоплазме выявлялось увеличенное количество РНК и общего белка. При обработке препаратов акрединовым оранжевым ядра большей части моноцитов и лимфоцитов флюоресцировали зеленоватым светом, а цитоплазма оранжевым, что так же свидетельствовало об активном состоянии клеток (Фото 26).
Фото 26. Гистологический срез стволовой части мозга щенка на 40 сутки после заражения. Люминесцентная микроскопия. Препарат окрашен акредин - оранжевым. Показан периваскулярный инфильтрат вокруг крупного сосуда. Цитоплазма мононуклеаров флюоресцирует ярко оранжевым светом, что свидетельствует об их активном состоянии.
Таким образом, при экспериментальном токсоплазмозе мы наблюдали выраженный паразитарный сепсис с поражением, практически, всех органов и систем организма животных. Поэтому практикующий ветеринарный врач, при диагнозе «острый или подострый токсоплазмоз» должен осознавать, что речь, в первую очередь, идёт о токсоплазмозном сепсисе. Обнаружить при этом первичный токсоплазмнозный очаг у животного заразившегося токсоплазмами в естественных условиях очень трудно, поскольку токсоплазмы имеют множество путей проникновения. Поэтому лечение больного животного должно быть направлено, с одной стороны, на уничтожение внеклеточных токсоплазм, которые тысячами циркулируют по кровеносным и лимфатическим сосудам; с другой - важно помнить, что при остром токсоплазмозе большое количество токсоплазм подвергаются дистрофии и гибели. В результате гибели паразитов, дистрофии паренхиматозных клеток и некрозов в различных органах, наступает выраженная интоксикация организма животного. В связи с этим, необходимо как можно быстрее очистить организм животного от эндотоксинов путём капельниц и мочегонных препаратов. В теоретическом плане важно понимать, что в острую фазу заболевания, какое -то время, в течение 15 – 20 суток, многие токсоплазмы находятся внеклеточно, в просветах кровеносных и лимфатических сосудах. А те паразиты, которые включены в клетки крови и клетки РЭС обязательно покинут их и окажутся в просветах кровеносных и лимфатических сосудов, в зоне досягаемости противопаразитарных препаратов. Инвазированные токсоплазмами паренхиматозные клетки, клетки крови и клетки РЭС не преврвщаются в тканевые цисты. Тканевые цисты размножения токсоплазм – это внеклеточные образования. Исключение составляют только цисты, формирующиеся в саркоплазме мышечных волокон миокарда и скелетных мышц. Но это особый вопрос. Поэтому врачу важно не пропустить фазу активного размножения токсоплазм и провести активное лечение на уничтожение внеклеточных токсоплазм, на протяжении хотя бы 10 – 15 суток. В своё время, нам с профессором В.Ф.Новинской удавалось успешно лечить острый экспериментальный токсоплазмоз щенков путём перорального введения животным дараприма, сульфадимизина и фолиевой кислоты. Однако при этом мы наблюдали выраженные побочные явления, в виде угнетения работы красного костного мозга и синтеза РНК в макрофагах и клетках РЭС. Кроме того, применение только специфической терапии было малоэффективно при хроническом и латентном течении болезни.
Учитывая экспериментальный опыт лечения токсоплазмоза у собак, мы, в настоящее время, в ветеринарной клинике Центра охраны здоровья животных г. Киева, разработали несколько схем лечения, как острого, так и при обострениях хронического спонтанного токсоплазмоза. Эти схемы позволяют в 60 – 70% случаев успешно лечить, как острый, так и хронический токсоплазмоз. Основу лечения при этом составляют не только специфические противопаразитарные препараты, но мумиё и АСД – фракция 2. Опыт работы показывает, что противотоксоплазменные препараты плохо переносятся животными, особенно кошками, Поэтому, мы разработали методику введения их с помощью электрофореза.
К чему может привести не выявленный вовремя токсоплазмоз? Доктор О.И. Елисеева считает что - не выявленный вовремя токсоплазмоз является угрозой не только самому человеку, но и всему будущему человечеству. Как известно, токсоплазмоз особенно опасен для будущего ребёнка. Плод в чреве матери не имеет собственной иммунной системы. Его защищают только антитела матери, проникающие через плаценту. Но материнским Т-лимфоцитам, способным уничтожить токсоплазмы, вход в кровеносную систему плода запрещен. Потому что Т-лимфоциты могут принять зародыш за гигантский антиген и начать борьбу с ним. Поэтому токсоплазмы, проникшие через плаценту в плод, быстро и бесконтрольно размножаются, вызывая обширные и часто фатальные поражения головного мозга. Работая окулистом и нейрорентгенологом, я видела много детей с врождённым токсоплазмозом со страшными осложнениями: микроцефалия, гидроцефалия, анизорбита, анофтальм, энцефалит в сочетании с менингитом, церебральный арахноидит с такими синдромами как диенцефальный, эпилептиформный, вестибулярно-мозжечковый, гипертензионный. Так же у детей наблюдались двигательные нарушения и изменения психики - от астенического до органического снижения умственной деятельности. У многих детей при токсоплазмозе выявлялись поражения глаз, сердца, лимфатических узлов, кальцификаты в головном мозге, легких. О.И. Елесеева для потверждения выше сказаного сылается на данные диссертации С.Э.Саркисова который указывается, что бесплодие токсоплазменного генеза обусловлено перенесенным сальпингоофоритом с развитием непроходимости труб и нарушениями гипоталамо-гипофизарно-яичниковой системы. При этом отмечается нарушение менструальной функции. На вскрытиях матки после операций находили в её стенках цисты токсоплазм. Учитывая, что носительство токсоплазмоза в мире приближается к 50%, мы можем себе представить масштабы, грозящей нам демографической опасности.
Также токсоплазмоз особенно опасен для больных с имуннодифицитом. В их организме почти не остаётся Т-лимфоцитов и человек оказывается беззащитным перед токсоплазмами, как младенец в утробе матери. У человека начинается расстройство сознания и в некоторых случаях наступает смерть.
ЧАСТЬ ПЯТАЯ
ОБЩЕЕ ЗАКЛЮЧЕНИЕ И ВЫВОДЫ
Анализ данных литературы и «крики» о помощи беременных женщин, а также наш многолетний опыт работы с мелкими домашними животными свидетельствует, что проблема токсоплазмоза, как была актуальной для медицины и ветеринарии в прошлом веке, таковой она остаётся и по сегодняшний день. Разница заключается лишь в том, что в прошлом столетии в СССР было два авторитетных центра по изучению проблемы токсоплазмоза – в Москве, возглавляемого профессором Дмитрием Николаевичем Засухиным и в Алма -Ате, возглавляемого академиком Илларионом Григорьевичем Галузо. В этих центрах не только изучались различные вопросы, связанные с биологией токсоплазм, воздействия их на организм человека и животных, но и готовились диагностические препараты, анализировалась литература, издаваемая в разных странах мира по различным вопросам проблемы токсоплазмоза. И самое главное, что в этих центрах организовывались курсы и семинары для ветеринарных и медицинских врачей по разной тематике проблемы токсоплазмоза. После распада СССР и закрытию этих центров, к сожалению, на русско - язычнм пространстве не организовано ничего подобного. Как следствие, многие случаи невыявленного вовремя токсоплазмоза. А это явлется угрозой не только самому человеку, но влияет на демографию общества в целом, поскольку связано с рождением детей инвалидов или вообще отсутствия способности женщин рожать здоровое потомство.
В последнее время в странах бывшего СССР появилось множество отдельных Гуру по токсоплазмозу, которые активно используя новые возможности средств массовой информации, особенно телевидение и Интернет (Ютуб) стали вещать не только о том, что проблема токсоплазмоза надуманная, но и рекомендовать для решения, например, проблемы патологии беременности связанной с токсоплазмозом, (только вдумайтесь! ) заводить в домах кошек. При этом, по утверждению таких «специалистов», не только будет решена проблема с рождением здоровых детей, но и пожизненным иммунитетом к токсоплазмам. Создаётся такое впечатление, что в двадцатом веке над проблемой токсоплазмоза работали некомпетентные учёные, которые не могли понять такой простой истены в решении проблемы токсоплазмоза, как обзавестись кошками.
В настоящее время, многие медецинские и ветеринарные врачи, практически, дезинформированы в отношении реальной опасности токсоплазмоза для здоровья людей и животных и не занимаются их лечением. А те доктора, которые осознают важность проблемы, вынуждены комерцилизировать свою научную и практическую работу, поскольку правительствами стран СНГ на проблему токсоплазмоза, практически, не выделяется никаких средств. А жаль! Поскольку в настоящее время достоверно показано, что проблема токсоплазмоза не ограничивается только рождением здоровых детей. Токсоплазмы вызывая даже латентное течение болезни, способны изменять психическое состояние людей. Отсюда напрашивается вывод: обследование на токсоплазмоз необходимо проводить не только женщин до беременности и во время беременности, но и всех (мужчин и женщин) стремящихся во власть, от которых затем будут зависить судьбы не только отдельных людей, но и целых стран.
В отношении первичного очага при токсоплазмозе, к сожалению, многое ещё остаются слабо изученным, поскольку в естественных условиях, исследовать, что происходит при проникновении токсоплазм в организм человека и животных, практически, не возможно. Сообщения Е.А.Шевкуновой и Т.П. Федичкиной (1978,2006), а так же наши экспериментальные исследования свидетельствуют:
Во – первых - в кишечнике, при пероральном заражении животных и брыжейке белых мышей при заражении их внутрибрюшинно вирулентными штаммами токсоплазм, образуется не один, а множество первичных очагов. И в период острого течения заболевания они не исчезают, не инкапсулируются, как при некоторых инфекционных заболеваниях. Наоболот, в первичные очаги мигрирует большое количество лейкоцитов – нейтрофилов, лимфоцитов и моноцитов. А как показали исследования в цтоплазме и ядрах этих клеток токсоплазмы активно размножаются. Поэтому первичные очаги можно рассматривать, как места активного размножения токсоплазм на всём протяжении острого процесса, способствующие активизации токсоплазмозного сепсиса. Морфологические изменения в органах при токсоплазмозе, связаны не только с непосредственным воздействием паразитов, но и с нарастающей интоксикацией и алергинезацией организма хозяина. Наши исследования показали, что аллергические компоненты патогенеза, при токсоплазмнозном сепсисе ещё слабо выражены, однако они имеют место и зависят от вида и возраста животных. В наших экспериментах они были ярче выражены у щенков, чем у котят и белых мышей. В то же время, у кошки павшей от острого приобретённого токсоплазмоза в ветеринарной клинике Центра охраны здоровья животных г.Киева, аллергические и токсические изменения в органах были преобладающими.
Следует особо подчеркнуть, что цитологически изучая большое количество препаратов приготовленных из брыжейки и гистологические срезы из различных органов, мы не наблюдали превращение псевдоцист в тканевые цисты. Псевдоцисты - это одна из стадий развития паразитов, где происходит подготовка токсоплазм (накопление в их цитоплазме амлопектина) к внеклеточному колониальному их размножению и развитию, завершающаяся образованием тканевых цист размножения. По нашим наблюдениям, токсоплазмы покидают псевдоцисты и мигрируют затем в органы и ткани, содержащие большое количество гликогена и активно снабжающиеся кислородом - головной мозг, миокард, скелетные мышцы и глаза, где и формируют внеклеточные тканевые цисты. Исключение при этом составляют тканевые цисты, образующиеся в саркоплазме мышечных волокон миокарда и скелетных мышц..
Во - вторых - пероральное заражение нами кошек вирулентным штаммом токсоплазм RH показало, что даже при отсутсвии половой фазы размножения в эпителии ворсинок, в просвет кишечника выделяляется огромное количество (не ооцист!), а трофозоитов и мерозоитов, находящихся, как внутри лейкоцитов, так и свободно. Поэтому не трудно понять, что свежий кал кошек, при кормлении животных сырым мясом, представляет не меньшую опасность для окружающих, чем кал содержащий изоспоры. Учитывая наблюдения Е.П.Ковалёвой и её сотрудников (1988), что у кошек и собак трофозоиты токсоплазм с экскретами, включая кал, выделяются в течение 212 суток после экспериментального заражения (срок наблюдения), то можно сделать ещё важное заключение: собаки представляют не меньшую опасность для окружающих, чем кошки, если их кормить сырым мясом.
В третьих - изучение первичных очагов при экспериментальном токсоплазмозе, достоверно показало, что токсоплазмы, активно размножаются, вначале в лейкоцитах, а затем уже в клетакх РЭС местной ткани и в других клетках организма хозяина. Наши исследования первичных очагов при экспериментальном токсоплазмозе животных демонстрируют, что токсоплазмы, как и другие токсоплазмиды, активно используют лейкоциты - нейтрофилы, лимфоциты, моноциты и даже плазмобласты, а так же клетки РЭС для своего размножения. При этом паразиты проникают не только в цитоплазму клеток, но и в их ядра. Поэтому говорить о незавершонном фагоцитозе при токсоплазмидозах будет неправильно. Это ещё один миф в проблеме токсоплазмоза и других токсоплазмид. Проникают токсоплазмы в клетки человека и животных не путём фагоцитоза, а совершая передним концом активные вращательные движения. Профессор Г.Т. Акиншина (2002г.), многие годы изучавшая биологию токсоплазм в различных культурах клеток считает, что токсоплазмы обладают скользящим типом движения. А проникновению их внутрь клетки, кроме активных вращательных движений, способствуют ферменты расположенные в передней части тела паразита . В своей статье «Токсоплазмоз, журнал Биология №45/2002.» Г.Т. Акиншина приводит уникальную фотографию, сделанную на сканирующем микроскопе, где заснят момент внедрения нескольких токсоплазм в клетку хозяина (Фото1).
Фото 1. Часть 5. Токсоплазмы на поверхности клетки. Фотграфия взята из работы Г.Т. Акиншиной.
Подтверждением тому, что токсоплазмиды проникают в клетки не путём фагоцитоза, а в резульнате своего активного движения является эндогенное размножение одного из токсоплазмоподобного паразита из отряда Toxoplasmida Besnoitia besnoiti. Безноитии в фазу формирования псевдоцист проникают в ядра различных клеток, в том числе клетки, которые фагоцитозом не обладают, например, гладкомышечные волокна дермы (Фото 2 - 5).
Фото 2. Часть 5. Гистологический срез кожи бычка, подострая фаза безноитиоза. Видны разные стадии размножения безноитий в клетках воспалительного пролиферата - внутриядерное размножение безноитий в гистиоците (показано двумя стрелками) и в цитоплазме лимфоцитов (показано стрелками). В паразитах чётко можно различить ядро и цитоплазму. Окр. железным гематоксилином и эозином.
Фото 3.Часть 5. Гистологический срез дермы бычка. Показано большое количество ядер воспалительного пролиферата инвазированые безноитиями. В отдельных паразитах отчётливо можно видеть увеличенное ядро и широкую зону цитомлазмы паразитов. Окраска железным гематоксилином и метиленовым синим.
Фото 4. Часть 5. Гистологический срез кожи бычка спонтанно зараженого токсоплазмоподобным паразитическим простейшим Besnoitia besnoiti. Показано ядро - псевдоциста гладкомышечной клетки. Вокруг псевдоцисты видна широкая зона гидролизированной окружающей ткани - гладкомышечных волокон и ядер воспалительного инфильтрата. Окраска железным гематоксилином и эозином.
Фото 5.Часть 5. Гистологический срез кожи бычка, подострая фаза течения безноитиоза. Хорошо виден выход мерозоитов из трёх ядерных псевдоцист. Окраска железным гематоксилином и эозином.
ВЫВОДЫ
1. При пероральном и внутрибрюшинном заражении животных в тонком отделе кишечника и на серозных оболочках (брюшине) брюшных органов, образуется не один, а множество первичных очагов.
2. На всём протяжении острого токсоплазмоза, первичные очаги не исчезают, они инфильтрируютя большим количеством лейкоцитов, которые используются токсоплазмами для своего размножения и развития.
3. На всём протяжении острого токсоплазмоза, первичные очаги служат поставщиками токсоплазм во внутренние органы и тем самым способствуют развитию токсоплазмозного сепсиса.
4.Токсоплазмозный сепсис патоморфологически характеризуется общей паразитемией с образованием в различных органах микронектозов, связанных, как с непосредственным воздействием токсоплазм на инвазированные клетки, так и с их токсическим и аллергическим воздействием.
5. При токсоплазмозном сепсисе, токсоплазмы размножаются, как внутриклеточно, так и внеклеточно, как путём бинарного деления, так и шизогонии, как в цитоплазме инвазированных клеток, так и в их ядрах.
6. Токсоплазмы в организме промежуточных хозяев, в первую очередь, размножаются в клетках крови – лейкоцитах, а затем уже в клетках РЭС, гепатоцитах и других клетках заражённого животного. Поэтому, учитывая их эндогенное развитие и размножение, а так же циркуляцию в природе, токсоплазм правильнее было бы выделить вместе с другими токсоплазмоподобными паразитами в отряд Toxoplasmida подкласса Haemosporinа, класса Sporozoa.
ПРИМЕЧАНИЕ: Если, кого заинтересовала литература, приведённая в нашей статье, пишите, мы поможем найти эти источники.
Телефон для контакта - (044) – 426 – 47 – 76 (78).
Email: bugaev@ukr.net
- © 2013-2015 www.vetbugaev.kiev.ua
- Все права защищены.
- Использование любых материалов, размещённых на сайте, разрешается при условии ссылки на www.vetbugaev.kiev.ua
- При копировании материалов со страницы www.vetbugaev.kiev.ua для интернет-изданий – обязательна прямая открытая для поисковых систем гиперссылка. Ссылка должна быть размещена в независимости от полного либо частичного использования материалов. Гиперссылка (для интернет- изданий) – должна быть размещена в подзаголовке или в первом абзаце материала.